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使用Vivacon 500 去除PCR反应之后的引物

PCR (聚合酶链式反应) 是在分子生物学领域应用非常广泛的一种试验方法，例如用于克隆片段准备、扩增DNA序列，法医认证分析。这些应用可能或多或少地对PCR反应组分比较敏感。PCR反应组分含有多种盐、自由核苷酸片段，甘油，蛋白、引物。特定的限制酶以及DNA连接酶对这些污染物比较敏感，因此，许多下游应用需要进行PCR产物清洗。

这篇应用文档里，我们显示使用Vivacon500超滤离心管可有效去除引物片段，30 kDa Hydrosart膜可以有效保留300 bp DNA片段同时去除25 bp引物。

材料方法

PCR样品由100μg/ml 300 bp PCR 片段和2μM 25 bp引物溶于E缓冲液, pH 8.0, 50μl PCR 样品和450 μl TE缓冲液被分别加样到 4个Vivacon 500超滤离心管，然后5,000g离心15分钟，然后再加入 450μl TE 缓冲液, pH 8 ，再次5,000g离心15分钟再次离心条件为2,500g 20 s.随后对引物去除情况进行12% TBE-Polyacrylamide SDS胶的电泳分析5μl原始样品, 次离心产物，冲洗后离心产物，每个样均做二次重复。

结果

SDS电显示泳胶结果30 kDa Vivacon500超滤管可以有效去除引物，30分钟实验过程后300 bp PCR 片段可以有效回收，单次离心后 80%引物被去除，第二次离心后95%引物被去除。

使用30 kDa Vivacon500可以有效去除引物及PCR 反应组分，使300 bp 及以上DNA片段PCR样品适用于后续应用。

12% TBE-Polyacrylamid SDS胶30 kDa Vivacon®500

Lane 1 300 bp DNA片段 + 25 bp 引物 – 原始样品

Lane 2 300 bp DNA片段 + 25 bp 引物 – 次离心产物 (1)

Lane 3 300 bp DNA片段 + 25 bp 引物 – 次离心产物 (2)

Lane 4 300 bp DNA片段 + 25 bp 引物 – 冲洗后离心产物 (1)

Lane 5 300 bp DNA片段 + 25 bp 引物 – 冲洗后离心产物 (2)